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抗原修復(fù)鍋的使用方法

 更新時間:2018-09-25 點擊量:4120

抗原修復(fù)鍋Antigen Retriever

    
免疫組織化學(xué)方法成功與否關(guān)鍵在于抗原決定簇的保存和暴露.組織經(jīng)甲醛固定.甲醛的醛基與

抗原蛋白的氨基交聯(lián),使決定簇的構(gòu)像改變.從而影響檢測蛋白表達.要充分暴露抗原決定簇,通

常用到抗原修復(fù)鍋。強適于甲醛固定的組織,經(jīng)石蠟包

埋后進行免疫染色前的處理,配合特別的抗原修復(fù)緩沖液確保你得到搞質(zhì)量的免疫染色效

果。

· 一次可以在6中不同緩沖液中運行,進行抗原暴露

· 僅暴露抗原決定簇,不損傷組織的形態(tài)

· 實驗結(jié)果穩(wěn)定,結(jié)果重現(xiàn)性高

· 系列的玻片在獨立環(huán)境中經(jīng)過處理

抗原修復(fù)鍋怎樣工作?

    看上去,抗原修復(fù)鍋似我們烹飪的高壓鍋。這是一款功能*的“高壓鍋,主要用于抗原暴露

的工作,主要的工作原理也是裝玻片的幾個分室可以達到高溫(>120°C)高壓。靈敏的傳感控制

器來保持一定的溫度和壓力及一定的時間,這些工作參數(shù)都是經(jīng)過嚴格的科學(xué)實驗得到的數(shù)

據(jù)。當(dāng)達到需要的溫度,抗原修復(fù)鍋會在該溫度下保持幾分鐘,之后鍋內(nèi)玻片被冷卻2個多小

時,特殊設(shè)材質(zhì)的內(nèi)鍋體控制了鍋和玻片的冷卻速度。 

誰是受益人?

    研究病理的實驗室,那里需要高質(zhì)量染色照片(用來發(fā)表)的

    缺乏技術(shù)人員的實驗室,學(xué)生和博士后均可以處理玻片進行組織染色,且不需要很多時間來摸索

    小型病理實驗室,每天處理的玻片數(shù)量有限

怎樣選擇一種緩沖液(Buffer

    如果你已經(jīng)知道哪種緩沖液用在微波的某種組織抗原修復(fù),那么用抗原修復(fù)鍋時,這種緩沖

液也同時適用的機會很大。我們提供四種即用型緩沖液R-Buffer A/B/C/U,同時也提供同種更加

溫和的組織處理緩沖液,我們稱之G系列,R-Buffer AG/BG/CG/UG。

    
選擇Buffer,主要考慮以下兩點:


1.  抗原的自然特性以及所選擇的抗體


抗原自身特性和抗原的位置都是首要考慮。我們建議你剛開始的時候選擇抗原表達環(huán)境的

適Buffer。以下是經(jīng)驗供大家參考:

Most of the nuclear antigens (apoptosis-related, survival-related, proliferation-r

elated) R: Buffer A (or AG).

Cell adhesion molecules, cell membrane antigens (extracellular domain) R: Buffer A (or AG)

Cytoskeleton and cytoskeleton-associated molecules – R:Buffer A (or AG)

Intracellular domain of some adhesion molecules and surface receptors – R:Buffer B (or BG)

Intracellular domain of some adhesion molecules and surface receptors – R:Buffer C (or CG)

Most of antibodies raised against a linear peptide – R: Buffer U (or UG)

2.  固定液以及固定程度

建議的組織切片的抗原修復(fù)處理是一種針對普通的適化狀態(tài)切片。如果用來切片的組織塊沒有

充分固定,或者過固定(留在福爾馬林溶液中時間過長),或者用了其它的固定液,那么,處

理組織切片的流程方案需要重新修訂,便利的辦法是選擇使用G系列緩沖液。對于過固定的

材料一般推薦用U buffer,或者在同一Buffer里面增加循環(huán)

 

抗原修復(fù)鍋技術(shù)參數(shù):

Heigh

335 mm

Capacity

9 litres

Max. Instrument length

228 mm

Width.

340 mm

Net Weight

4.5 kilos

Internal chamber Dimensions (d/h)

210/230 mm

Max. Load Weight

3.0kg

Max. Single Fault Temperature

133.3°C


使用抗原修復(fù)鍋進行染色的效果示例


1.福爾馬林固定,石蠟包埋,人乙狀結(jié)腸組織切片,經(jīng)抗原修復(fù)鍋進行抗原暴露,R-

Buffer C (pH 6.0),組織玻片降溫過夜,抗體MIB-1,抗原Ki-67,R-Detect HRP系統(tǒng)染色

 

2. .福爾馬林固定,石蠟包埋,人乙狀結(jié)腸組織切片,經(jīng)抗原修復(fù)鍋進行抗原暴露,R-

Buffer A (pH 8.1),組織玻片降溫過夜,抗體#4B11,抗原CD8 (cell membrane)R-

Detect HRP系統(tǒng)染色.

儀器及配件的選購:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

62700-20

Retriever 220 volt (內(nèi)含3chamber

1

62705-01

Slide Chamber

3/pk

62705-02

Chamber Rack

1

62705-03

Lifting Device

1

62705-05

Cord Set (Europe)

1

緩沖液的選購:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

62706-10

R-Buffer A (10x)

250 ml

62706-11

R-Buffer B (10x)

250 ml

62706-12

R-Buffer C (10x)

250 ml

62706-13

R-Buffer U (10x)

250 ml

62707-10

R-Buffer AG (2x)

250 ml

62707-11

R-Buffer BG (2x)

250 ml

62707-12

R-Buffer CG (2x)

250 ml

62707-13

R-Buffer UG (2x)

250 ml

 

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